ABSTRACT
Abstract Recombinant proteins are a suggested alternative for the diagnosis of toxocariasis. The current Escherichia coli recombinant protein overexpression system usually produces insoluble products. As an alternative, yeast such as Pichia pastoris have secretory mechanisms, which could diminish the cost and time for production. This study aimed to produce recombinant proteins in Pichia pastoris and verify their sensibility and specificity in an indirect ELISA assay. Two sequences (rTES-30 and rTES-120) of Toxocara canis excretory-secretory antigens were cloned in a pPICZαB vector and expressed in P. pastoris KM71H. Sera samples collected from human adults infected by Toxocara spp. were tested by indirect ELISA using rTES-30 and rTES-120 as antigens. Recombinant proteins were detected at 72 hours after induction, in the supernatant, as pure bands between 60~70 kDa with hyperglycosylation. Regarding diagnosis potential, recombinant antigens had high specificity (95.6%); however, sensitivity was 55.6% for rTES-30 and 68.9% for rTES-120. Further deglycosylation of the P. pastoris antigens did not seem to affect ELISA performance (p>0.05). The low sensitivity in the serodiagnosis diminished any advantage that P. pastoris expression could have. Therefore, we do not recommend P. pastoris recombinant TES production as an alternative for the diagnosis of toxocariasis.
Subject(s)
Humans , Pichia/immunology , Recombinant Proteins/blood , Toxocariasis/diagnosis , Immunologic Tests , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Sensitivity and SpecificityABSTRACT
The aim of the present study was to test the effectiveness of a sausage-casing membrane for dialysis of Toxocara excretory-secretory antigens (TES). The protein concentrated by the tested membrane was compared with that obtained using a Sigma commercial membrane, as were the protein fractions found by polyacrylamide gel electrophoresis. Standard positive and negative serum samples were evaluated in an ELISA immunoassay, and equivalent data were obtained in all steps, indicating that the sausage-casing membrane is efficient, besides being less expensive to process.
O objetivo do presente estudo foi testar a eficácia de uma membrana utilizada para o preparo de embutidos, na obtenção do antígeno de excreção e secreção de Toxocara (TES). A concentração protéica foi comparada com a obtida com a membrana Sigma tanto quanto as frações protéicas separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida. Amostras de soros padrão positivo e negativo foram avaliadas no teste imunoenzimático ELISA. Dados equivalentes foram observados em todas as etapas, sugerindo que a membrana possa ser utilizada para diálise por ser eficiente e de menor custo no preparo do antígeno.
Subject(s)
Parasitology/analysis , Parasitology/methods , /methods , Toxocara/enzymology , Toxocara/immunology , Membrane Filters/analysis , Microdialysis/methods , MicrodialysisABSTRACT
Para estudar a freqüência da infecçäo pelo Toxocara canis em crianças de classes sociais diferentes de Brasília, Brasil, foram testados soros de 602 crianças de ambos os sexos, de 1 a 12 anos, distribuídas em dois grupos representativos de condições socioeconômicas distintas. As amostras do primeiro grupo foram obtidas em laboratório público que atende bairros pobres. As do segundo grupo foram colhidas em laboratório privado, que serve à classe média. Os anticorpos anti-Toxocara foram detectados pelo método ELISA, com antígenos de Toxocara canis, e absorçäo com antígenos do Ascaris suum. A prevalência de soropositividade foi de 21,8 por cento (66/302) no primeiro grupo e de 3 por cento (9/300) no segundo (p<0,0001). Näo houve diferença quanto ao gênero ou idade das crianças. Os resultados sugerem significativa prevalência de toxocaríase na populaçäo infantil de Brasília, com predomínio nas classes sociais menos favorecidas economicamente